先天性耳畸形的病因目前还不完全明确，主要包括环境和遗传因素等方面。先天性耳畸形主要涉及胚胎发育期间第一和第二鳃弓的异常，主要表现外耳的先天发育性结构异常，其严重程度主要表现为从轻度结构异常到完全性耳廓缺失，并且可伴有外耳道狭窄和外耳道闭锁等一系列先天性外耳异常，轻者耳廓略小于正常， 畸形严重者耳廓全部消失。

PAX基因主要调控发育基因的转录、促进细胞增殖和自我更新、抑制细胞凋亡、引导细胞前体的定向迁移和分化等。Pax-Six-Eya-Dach是控制动物眼、耳、脑神经和肌肉发生及发育的关键基因网络。PAX3基因是Waardenburg综合征的致病基因，此类患者也表现出不同程度的颅面部发育缺陷，研究显示Pax3通过调控神经嵴细胞的分化和迁移参与胚胎生长发育的调控。EYA是直接参与胚胎发育过程中的细胞增殖、组织分化和器官发育的重要调控基因，家系研究显示EYA4基因突变可导致耳部畸形和耳聋，Eya4基因敲除的斑马鱼表现出耳泡细胞减少、神经系统发育异常等。Six基因是与Eya基因共同参与骨骼肌肉形成调控的重要基因，Six1缺失的小鼠模型可表现出严重的中耳、外耳和听神经的畸形和缺陷。

SPF级1-10日龄乳鼠，ICR、C57或Balb/c均可。

设计方案如下：

Pax1paired box 1 [Musmusculus(house mouse) ]

Gene ID: 18503

Also known as: un; wt; hbs; Pax-1; hunchback;undulated

Location: 2 G2; 2 72.63 cM

Exon count: 6

Chromosome 2 - NC_000068.7

Homo: exon2:c.C638G:p.S213W

Mus: exon2:c.CT611-612GG:p.S204W

m-PAX1-gRNA up15’TAGGACTGATGGAGCTCACAGA

M-PAX1-gRNA down15’aaactctgtgagctccatcagt

Objective

5’accggctactggctgatggcgtttgtgacaagtacaacgtgccctctgtgagctccatcagtcgcatcctgcgaaataagattggcagcc

mut

5’accggctactggctgatggcgtttgtgacaagtacaacgtgccctGGgtgagctccatcagtcgcatcctgcgaaataagattggcagcc

m-PAX1-oligo

5’GGCTGCCAATCTTATTTCGCAGGATGCGACTGATGGAGCTCACCCAGGGCACGTTGTACTTGTCACAAACGCCATCAGCCAGTAGCCGGT

经基因型鉴定获得三只点突变杂合子小鼠，其中两只在1月龄时可观察到单侧耳部畸形，随着年龄的增大，畸形不明显。现在繁殖出F1代杂合子也可以观察到耳部轻度畸形表型，耳廓上部软骨向下卷曲，近似人类杯状耳畸形。